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AR Luciferase Reporter MDA-MB-453 Stable Cell Line

AR熒光素酶報告基因MDA-MB-453穩(wěn)定細胞系

描述： 

AR響應(yīng)性熒光素酶報告基因MDA-MB-453穩(wěn)定細胞系來自人乳腺癌，并在AR反應(yīng)元件的控制下穩(wěn)定表達螢火蟲螢光素酶報告基因。該細胞系是一種理想的細胞模型，用于監(jiān)測由激素治療，強制基因表達和基因敲除引發(fā)的雄激素受體途徑的激活。

原理

雄激素受體（AR）在男性生殖器官的發(fā)育中起關(guān)鍵作用。當(dāng)被刺激激活時，AR從細胞質(zhì)轉(zhuǎn)移到核中，然后結(jié)合DNA識別位點并調(diào)節(jié)基因表達。Signosis已建立了AR熒光素酶報告基因穩(wěn)定細胞系，其中熒光素酶活性與AR的活性特異性相關(guān)。因此，細胞系可用作監(jiān)測由刺激治療引發(fā)的AR的激活的報告系統(tǒng)，強制基因表達和/或基因敲低。通過轉(zhuǎn)染AR熒光素酶報道載體與G418表達載體，然后G418選擇建立細胞系。隨后篩選G418抗性克隆，以顯示依托泊苷誘導(dǎo)的熒光素酶活性。選擇具有zui高折疊誘導(dǎo)（22倍）的克隆并擴增以產(chǎn)生該穩(wěn)定的細胞系。

TF熒光素酶報告原理。  TF熒光素酶報道穩(wěn)定細胞株利用人工啟動子構(gòu)建體來驅(qū)動熒光素酶表達。啟動子區(qū)域可以由順式元件TF結(jié)合位點的多個重復(fù)序列，來自已知TF下游基因的啟動子區(qū)域的DNA片段或含有推定/已知的TF結(jié)合位點的DNA片段組成。TF可以通過細胞外刺激或通過細胞內(nèi)信號傳導(dǎo)途徑激活幾種方式。一旦激活，TF易位于細胞核，并經(jīng)常與相關(guān)因子相互作用以驅(qū)動基因表達。一旦熒光素酶表達，其可以在酶測定中產(chǎn)生光，并且測量的光量與TF活化的水平正相關(guān)。

數(shù)據(jù)

分析雄激素受體途徑記錄MDA-MB-453穩(wěn)定細胞系對刺激的響應(yīng)。 將細胞用包含10％FBS的DMEM在96孔板上接種過夜。然后在DMEM和0.1％FBS中分別用或不用20nM DHT處理細胞16小時。

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