pnabio具有NLS的Cas9蛋白

Cas9 Protein with NLS

與引導(dǎo)RNA結(jié)合的Cas9蛋白比質(zhì)?；騧RNA轉(zhuǎn)染為CRISPR / Cas9技術(shù)提供了優(yōu)勢(shì)。大的好處是您可以使RNP復(fù)合物易于在體內(nèi)工作。Cas9蛋白壽命短（細(xì)胞中半衰期約為24小時(shí)），因此將脫靶效應(yīng)和鑲嵌性降至低。您還可以通過(guò)簡(jiǎn)單的裂解分析輕松地體外測(cè)試指導(dǎo)RNA的活性。此外，Cas9蛋白非常穩(wěn)定，與mRNA相比，活性確認(rèn)要容易得多。后，由于它不需要轉(zhuǎn)錄或翻譯，因此它在線(xiàn)蟲(chóng)，昆蟲(chóng)，植物和非典型模型系統(tǒng)等更廣泛的生物中具有活性。

PNA Bio提供的Cas9蛋白與NLS偶聯(lián)，可以注射/轉(zhuǎn)染。

Cy3-Cas9可以很容易地富集被CRISPR / Cas9復(fù)合物轉(zhuǎn)染的細(xì)胞。

體外裂解測(cè)定

將PCR產(chǎn)物與各種量的Cas9蛋白一起孵育并在凝膠上電泳。體外裂解測(cè)定是檢查sgRNA活性的簡(jiǎn)單方法。

RNP復(fù)合體的轉(zhuǎn)染

sgRNA的RNP復(fù)合體和各種Cas9蛋白通過(guò)電穿孔（Neon）或脂轉(zhuǎn)染胺（LF2000）轉(zhuǎn)染到NIH3T3細(xì)胞中。

注射RNP復(fù)合物

對(duì)于小鼠胚胎注射，將60ng / ul的Cas9蛋白和15ng / ul的兩個(gè)sgRNA各自的RNP復(fù)合物注射到小鼠胚胎中。從幼犬中提取尾巴DNA并進(jìn)行T7E1檢測(cè)?；疑硪吧?，綠色代表大缺失（＃2,3,4,8），紅色代表小in / del（＃5,6,7），藍(lán)色代表純合子。小in / del（＃9，10）。

Cas9蛋白

• 化膿性鏈球菌 NLS的Cas9蛋白
• 注射，轉(zhuǎn)染就緒
• 通過(guò)體外裂解測(cè)定，電穿孔（作為RNP復(fù)合物）和
  每批小鼠胚胎注射驗(yàn)證的活性
• 標(biāo)準(zhǔn)濃度（CP01，重構(gòu)為1 mg / ml）：20 ug，50 ug或200 ug（50 ug x 4）
• 高濃度（CP02和CP03，重構(gòu)為5 mg / ml）：250 ug（CP02）或1 mg（CP03，250 ug x 4）
• 包裝：CP01為20 ug或50 ug，CP02 / CP03為250 ug
• 建議使用CP01進(jìn)行顯微注射，建議使用CP02 / CP03進(jìn)行電穿孔
• 也可用：D10A切口酶（CN01）和D10A / H840A dCas9（CD01）蛋白
• 如果美國(guó)東部時(shí)間下午5點(diǎn)之前收到訂單，Cas9蛋白通常在同一天發(fā)貨
• 欲了解更多，請(qǐng)聯(lián)系我們 order@pnabio.com或單擊此處。

Cas9蛋白的液體形式

• 可用量為1 mg / ml或5 mg / ml
• CP04-100：1毫克/毫升（6 uM），20 ug x 5管
• CP04-500：5毫克/毫升（30 uM），100 ug x 5管

高保真SniperCas9蛋白 

• 具有高保真度且不影響活性的Cas9蛋白變體
• 通過(guò)定向進(jìn)化方法發(fā)現(xiàn)
• 可用1 mg / ml（CSP01）或5 mg / ml（CSP02）
• 閱讀有關(guān)SniperCas9的新出版物
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• 切口酶和dCas9蛋白

• 化膿性鏈球菌的帶有NLS的D10A Cas9切口酶蛋白（CN01和CN02）
• D10A / H840A Cas9用化膿性鏈球菌（CD01和CD02）的NLS裂解死亡蛋白
• 有50 ug大?。–N01 / CD01，重構(gòu)為1 mg / ml）或250 ug大?。–N02 / CD02）。

Cy3-Cas9和Cy3-dCas9蛋白

• Cy3用NLS（CP06）標(biāo)記的Cas9蛋白，可對(duì)轉(zhuǎn)染的細(xì)胞進(jìn)行分類(lèi)和可視化
• 共聚焦顯微鏡檢測(cè)熒光
• 通過(guò)體外裂解測(cè)定和細(xì)胞轉(zhuǎn)染證實(shí)活性
• 提供25 ug，50 ug，100 ug或200 ug（CP06-200）
• 濃度1 mg / ml或5 mg / ml
• 也提供Cy3標(biāo)記的dCas9蛋白（CD07）

Cy3-Cas9蛋白的活性通過(guò)電穿孔進(jìn)入細(xì)胞，然后進(jìn)行T7E1分析來(lái)確認(rèn)。通過(guò)共聚焦顯微鏡確認(rèn)熒光。